1. Conceptos de Microscopia de Luz y Electrónico, resolución y aumento.
2. Revisión general sobre grupos funcionales.
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2. Histoquímica clásica.
2.1 Fijadores y amortiguadores.
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2.2 Inclusión de tejidos (parafinas, polietilen glicol, resinas epóxicas y resinas acrílicas).
2.3 Microtomía convencional (cuchillas de acero, cuchillas de vidrio y diamante y crio-microtomía).
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2.4 Tinción y detección de lípidos.
2.5 Tinción de almidón y polisacaridos insolubles (APS).
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2.6 Tinción de taninos y lignina.
2.7 Tinción de proteínas y pectinas.
2.8 Revisión de artículos científicos.
Primer examen
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2.9 Tinción especifica para calosa (fluorescente y no fluorescente).
2.10 Tinción especifíca para enzimas (peroxidasas y catalasa)
2.11 Tinción fluorescente para ácidos nucleicos (ADN).
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Horas
Temas
Bot 616
Título: Histoquímica
Créditos: 3
Profesor responsable: Dra. Hilda Araceli Zavaleta Mancera
Teoría: Lunes y Miércoles de 9:00 a 10:30 (42 h)
Laboratorio: Miércoles 15:00 a 18:00
Profesor de Práctica: Dra. Hilda Araceli Zavaleta Mancera (42 h)
Asistentes de práctica: M.C. Esthela Torres Torres
Biol. Simón Morales
Periodo académico: Verano
Objetivos: Estudiar y analizar los principios teóricos y aplicados de la Histoquímica clásica y molecular, como una herramienta que permite el estudio de la composición y localización de moléculas especificas en tejidos, para el entendimiento e interpretación de diferentes fenómenos biológicos.
Introducción:
El estudio de la estructura vegetal genera información útil para la interpretación de procesos de crecimiento, diferenciación, organogénesis y fisiología tanto en plantas silvestres como cultivadas bajo diferentes sistemas de producción incluyendo los métodos de propagación in vitro. Sin embargo, las tendencias actuales de la investigación en plantas requieren el entendimiento de los procesos bioquímicos y moleculares que tienen lugar en los tejidos. Los avances en Bioquímica y Biología Molecular han permitido al investigador determinar la composición química y molecular de los objetos de estudio, sin embargo la localización in situ de estos compuestos mediante estas técnicas es limitada. La Histoquímica surge como disciplina hibrida que tiene por objetivo la localización in situ de moléculas específicas, ya sean productos del metabolismo de células y tejidos en condiciones naturales o experimentales así como la detección inmunológica de proteínas específicas. En décadas recientes la necesidad de localizar la posición de moléculas de la familia de ARN y ADN para la mejor interpretación de los procesos de regulación génica han conducido al desarrollo de técnicas más sofisticadas tales como la hibridación in situ, que permite el establecimiento de un mapa molecular. Aunado a las técnicas histoquímicas moleculares se han desarrollado marcadores fluorescentes y microscópicos especializados para su observación cuyas técnicas permiten la visualización clara de moléculas que se encuentran en los límites de resolución del microscopio de luz. El presente curso pretende revisar los principios teóricos y aplicados de las técnicas más comunes usadas en la Histoquímica clásica (identificación química) y molecular (inmonucitoquímica e hibridación in situ) asi como las técnicas ópticas involucradas.
El curso está divido en dos partes.
a) Histoquímica clásica. Identificación química de compuestos tales como, polifenoles , lignina, pectinas, lípidos, grupo amino, ADN, calosa, polisacáridos insolubles, suberina, fosfolípidos, almidon, fosfatasas, pectinas, Ca2+ y otros.
b) Histoquímica molecular. Inmuno-detección de proteínas “Western tissue prints”, hibridacion in situ, detección de ADN, ARN específicos. Incluyen técnicas de fluorecencia para detección ADN, calosa y otros.
Estas técnicas requieren de métodos y procedimientos particulares para el procesamiento de las muestras y obtención de cortes que serán incluidos en el curso. Durante el curso el alumno planteará y llevará a cabo una investigación corta para la solución de un problema específico de su interés.
Programa de sesiones teóricas
